иммуногистохимическое определение белка р63 экспрессируется что это значит

Иммуногистохимическое определение белка р63 экспрессируется что это значит

Комплексное исследование включает в себя два метода исследования (гистологическое и иммуногистохимическое), совместно использование которых позволяет повысить точность диагностики заболевания, определить оптимальные варианты лечения и скорректировать схему терапии.

Гистологическая и ИГХ диагностика опухоли простаты.

Complex histological and immunohistochemical examination with prostate tumor detection (Ck5, P63, AMACR).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани (биоптат) опухолевого образования предстательной железы.

Общая информация об исследовании

Рак предстательной железы (РПЖ) обусловлен развитием аномальных клеток в простате, которые могут неконтролируемым образом делиться и распространяться вне органа, поражая близлежащие или отдаленные части тела. Это, как правило, медленно развивающееся заболевание, которое в большинстве случаев в течение многих лет протекает бессимптомно, поэтому часто обнаруживается уже на продвинутых стадиях. В настоящее время летальность от этой патологии составляет 4,7%.

Альфа-метилацил-КоАрацемаза участвует в бета-окислении жирных кислот и метаболизме желчных кислот и может быть обнаружена в нормальных тканях (например, гепатоцитах печени, в тубулярном эпителии почек, эпителии бронхов, желчном пузыре). Начиная с 2000 г., после установления связи между повышенной экспрессией AMACR и наличием карциномы простаты, этот белок стал рассматриваться как онкомаркер. Повышение экспрессии альфа-метилацил-КоАрацемазы возможно и при карциномах других локализаций (например, колоректальных, овариальных, груди, мочевого пузыря, легких, почечно-клеточных), тем не менее данный маркер высокоэффективен, так как позволяет провести дифференциальную диагностику рака с другими заболеваниями и более точно определить стадию процесса. AMACR позитивен как в случае наличия предракового поражения (простатической интраэпителиальной неоплазии (ПИН), так и при карциномах простаты, в том числе при ASAP. Считается, что чем выше экспрессия альфа-метилацил-КоАрацемазы, тем агрессивнее ведет себя опухоль.

Дополнительными маркерами базальных клеток для диагностики аденокарциномы являются p63, цитокератины (Ck) 5/6, цистатин А54 и кальциклин. При помощи маркера p63 можно обнаружить белок p63 в ядрах базальных клеток. Ген, кодирующий выработку этого белка, относится к семейству p53 опухолевых супрессорных генов. р63 обладает широким спектром биологических функций, включая участие в делении и дифференцировке клеток, его можно обнаружить в различных видах эпителия. Определение р63 помогает провести дифференцировку между доброкачественными и онкологическими процессами. Высокомолекулярные цитокератины также относятся к маркерам базального эпителия предстательной железы и, как правило, меньше экспрессируются или отсутствуют при раке предстательной железы.

Использование во время проведения исследования сразу нескольких маркеров повышает его чувствительность.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Проводится морфологическая оценка опухоли согласно классификации ВОЗ, оценка экспрессии маркеров в атипичных клетках. Диапазон референсных значений экспрессии маркеров индивидуален и зависит от многих факторов.

Правильно интерпретировать результат исследования может только врач.

Источник

Иммуногистохимическое определение белка р63 экспрессируется что это значит

Иммуногистохимический метод исследования экспрессии маркеров рака предстательной железы: цитокератина Ck5, p63 и α-метилацил-КоА-рацемазы (AMACR), позволяющее более точно диагностировать заболевание, спрогнозировать варианты лечения и скорректировать схему терапии.

Синонимы английские

Immunohistochemistry with antibodies directed against basal cells (Ck5 and p63) and α‐methylacyl coenzyme A racemase (AMACR).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.

Общая информация об исследовании

Онкология предстательной железы является актуальной проблемой современной медицины. У пациентов с установленной локализацией патологического образования (чаще всего по результатам трансректального УЗИ) диагноз устанавливается путем гистологического исследования образцов ткани, полученных с помощью биопсии предстательной железы. Одна из основных диагностических задач, которую должно решить гистологическое исследование, – подтверждение или исключение злокачественности процесса. Сложности могут быть вызваны ограниченным количеством ткани, полученной с помощью игольной биопсии, а также вероятным необнаружением достаточного количества измененных желез для получения однозначного заключения. В этих случаях для подтверждения диагноза используют иммуногистохимию с антителами, направленными против базальных клеток (p63) и с альфа-метилацил-кофермент А-рацемазой (α-melhylacylcoenzymeAracemase – AMACR).

Одним из первых используемых иммуномаркеров являются моноклональные антитела 34βE12, которые связываются с высокомолекулярными белками цитокератина, экспрессируемыми в цитоплазме базальных клеток. Название данных антител в лабораторной диагностике – CK903, они успешно применяются для установления отсутствия базальных клеток в фокальных атипичных ацинарных пролиферациях малого размера. Однако данная методика имеет ряд недостатков в использовании и интерпретации результатов, поэтому чаще всего используется для подтверждения найденных изменений или как дополнительный метод в дифференциальной диагностике. Дополнительным маркерами базальных клеток для диагностики аденокарциномы являются p63, цитокератины (Ck) 5/6, цистатин А54 и кальциклин. При помощи маркера p63 можно обнаружить белок p63 в ядрах базальных клеток, этот метод является более чувствительным в определении базальных клеток, чем использование антител 34βE12. Иногда используют сразу несколько маркеров для повышения чувствительности методики.

Отдельно можно отметить маркер AMACR, который является высокоселективным и очень чувствительным к аденокарциноме. От 80 до 100 % аденокарцином предстательной железы окрашиваются AMACR, также окрашиваются около 21 % доброкачественных гиперплазий и различных форм атрофий, где сигнал будет более локализованным и слабым, чем при карциноме. Однако в случаях частичной атрофии ложноположительные результаты могут быть получены в 79 % случаев, поэтому рекомендовано использовать в гистохимическом исследовании сразу несколько маркеров.

Одновременное использование AMARC и маркеров базальных клеток с одним или двумя хромогенами имеет большую диагностическую ценность, особенно если выявлен один небольшой атипичный фокус и если фокус расположен только на одном разрезе, доступном для иммуногистохимической оценки.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Первичная биопсия с иммуногистохимическим исследованием проводится:

Повторная биопсия с иммуногистохимическим исследованием проводится:

Что означают результаты?

Иммуногистохимическое исследование является дополнительным методом диагностики, его результаты должны быть интерпретированы в контексте с другими данными клинико-лабораторного и инструментального обследований.

Что может влиять на результат?

Наличие острых заболеваний предстательной железы.

Кто назначает исследование?

Источник

ИГХ рака предстательной железы

Иммуногистохимические методы используются для выявления локализации того или иного клеточного или тканевого компонента (антигена) in situ посредством связывания его с мечеными антителами и являются неотъемлемой частью современной диагностики рака, обеспечивая обнаружение локализации в тканях различных клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.

Метод ИГХ нашел свое применение и в диагностике рака простаты. Маркеры рака предстательной железы выполняют 2 функции: используются для диагностики РПЖ и определяют потенциал злокачественности РПЖ. Определенные виды маркеров выполняют как одну, так и другую функцию (PSA, PSAP).

— цитокератины (общий цитокератин, СК-5/6, высокомолекулярный цитокератин) и маркер р63. Они экспрессируются базальным слоем эпителия. При РПЖ их экспрессия подавлена, они определяются в базальном эпителии доброкачественных структур предстательной железы.

— альфа-метилацил-КоА-рацемаза (AMACR). Повышение концентрации AMACR усиливает свободнорадикальные процессы в клетке и повреждение ДНК. Скорее всего это объясняет повышенный риск РПЖ при высоком уровне поступления разветвленных жирных кислот с пищей (например, с молочными продуктами или говядиной). Высокоэффективен при иммуногистохимическом исследовании и позволяет дифференцировать рак от других патологических процессов, а также более точно определить стадию заболевания, в том числе и в биопсийном материале. Этот маркер считается позитивным в 80-100% случаев малых очагов рака. Используется совместно с р63 маркером базальных клеток, что обеспечивает эффективность 92-97%.

— хромогранин А, синаптофизин, серотонин. Используются для нейроэндокринной дифференцировки.

— простатспецифический антиген (PSA). Синтезируется секреторным эпителием ПЖ при участии дигидростерона. PSA экспрессируется во всех аденокарциномах предстательной железы. Снижение или отсутствие экспрессии PSA констатируется при низкодифференцированном раке. При некоторых аденокарциномах экспрессия PSA исчезает после проведения гормонотерапии или лучевой терапии.

— простатическая кислая фосфотаза (PSAP). Ее экспрессия весьма близка к экспрессии PSA. Оба маркера особенно пригодны для дифференциальной диагностики рака простатического происхождения с опухолями другого генеза, а также для определения исходной локализации опухоли при метастазах. В редких случаях, когда в аденокарциноме предстательной железы экспрессируется только один из этих двух маркеров, именно экспрессия PSAP чаще всего сохранена.

— простатспецифический мембранный антиген (PSMA). Используется, когда остутствует экспрессия PSA и PSAP.

— андрогены и эстрогены. Обладают способностью стимулировать пролиферативные процессы в предстательной железе. Для андрогенов основной тканью-мишенью является эпителий, а для эстрогенов соединительная и мышечная строма предстательной железы. Используются для предсказания чувствительности к гормонотерапии.

— Ki-67. Ген, кодирующий Ki-67, расположен на длинном плече 10 хромосомы. Ki-67 относится к регуляторным белкам. Стадия РПЖ напрямую соотносится с количеством опухолевых клеток, экспрессирующих Ki-67, поэтому индекс Ki-67 является независимым показателем прогноза рецидива и выживаемости у больных РПЖ.

— bcl-2 и р53. Ген р53 локализуется в ядре клетки, является супрессором опухолевого роста, предотвращая вступление клетки с поврежденной ДНК в синтетическую фазу цикла и индуцируя апоптоз. Мутация гена р53 ведет к потере контроля пролиферации клеток, угнетению апоптоза. Утрата функции этого гена может быть связана с высоким метастатическим потенциалом опухоли и развитием андрогеннезависимого РПЖ. Наличие мутаций в гене р53 в сочетании с повышенной экспрессией белка Bcl-2 при РПЖ является неблагоприятным прогностическим фактором течения заболевания. Также нарушение экспрессии р53 коррелирует со снижением выживаемости после простатэктомии. Белки семейства Bcl (Bcl-2 и Вах) играют ключевую роль в регуляции процессов апоптоза. Они индуцируют или ингибируют апоптоз в клетках ПЖ. Ген Вс1-2 может задерживать апоптоз клеток ПЖ, вызванный р53 и другими стимуляторами, в том числе цитостатическими препаратами. В случае гиперэкспрессии ген Bcl-2 выступает в качестве онкогена. В ткани ПЖ в норме экспрессия Bcl-2 осуществляется только клетками базального слоя эпителия. В андрогеннезависимом РПЖ отмечается усиленная экспрессия гена Bcl-2, что является признаком гормоноустойчивости и резистентности к индукторам апоптоза.

— кадгерин Е и бетакатенин. Кадгерины являются мембранными гликопротеидами и играют важную роль в кальцийзависимой межклеточной адгезии. Считается, что утрата межклеточных «мостиков» и связи с соседними эпителиальными клетками является одним из первых этапов развития опухоли. Снижение экспрессии Е-кадгерина нередко наблюдается при РПЖ и коррелирует с выживаемостью, клинической и морфологической стадией заболевания.

— белки p21 и p27. Являются опухолевыми супрессорами и ингибируют все типы циклин-зависимой киназы (cyclin dependent kinase CDK), препятствуя вступлению клетки в очередную фазу цикла деления. Мутации генов, кодирующих р21 и р27, встречаются при раке предстательной железы достаточно часто и коррелируют с неблагоприятным прогнозом заболевания. Иммуногистохимическая экспрессия p21/p27 коррелирует с длительностью безрецидивного течения, выживаемостью, степенью местной инвазии, поражением регионарных лимфоузлов.

— pRb. Играет важную роль в регуляции клеточного цикла. Утеря гетерозиготности локуса Rb наблюдается более чем в 60% случаев РПЖ.

Отдельной подгруппой идут факторы роста, которые при проникновении в ядро клетки обладают способностью стимулировать или ингибировать деление и дифференцировку клеток:

— рецептор эпидермального фактора роста (EGFR). Трансмембранный гликопротеин, обладающий тирозинкиназной активностью. EGFR экспрессируется на поверхности как нормальных, так и трансформированных эпителиальных клеток и участвует в регуляции клеточного роста и дифференцировки. Экспрессия EGFR при РПЖ достигает 40%.

— инсулиноподобный фактор роста (IGF). Является одним из основных факторов роста в ПЖ, ответственных за фазу синтеза ДНК. Выработка IGF эпителиальными клетками ПЖ по аутокринному типу является одним из изменений, происходящих одновременно с развитием РПЖ. IGF способен усиливать локальное действие андрогенов. Определение IGF иммуногистохимическим методом в ткани с помощью моноклональных антител. Выявлена достоверная положительная корреляционная связь между степенью злокачественности опухоли и экспрессией IGF при РПЖ.

— фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Мультифункциональный цитокин, вызывающий пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток, в том числе и при РПЖ. Повышает способность эндотелиальных клеток к миграции, а опухолевых клеток к инвазии и метастазированию. При доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) экспрессия VEGF в опухоли ниже, чем при РПЖ, и наблюдается в менее чем 5% клеток.

— интерлейкин-8 (ИЛ-8). Является фактором роста с паракринным и аутокринным механизмом действия. Синтез ИЛ-8 осуществляется нейроэндокринными клетками ПЖ. Интерлейкин-8 и его рецептор CXCR1 при ДГПЖ, простатической интраэпителиальной неоплазии и андрогензависимом РПЖ иммуногистохимически не экспрессируется. В случае развития андрогеннезависимого РПЖ отмечается экспрессия рецепторов к ИЛ-8 CXCR2, что указывает на роль местных тканевых факторов роста в процессах пролиферации клеток РПЖ.

Источник

Иммунологические аспекты диагностики рака предстательной железы

¹ СПб ГБУЗ Клиническая больница Святителя Луки; Санкт – Петербург, Россия
2 ФГБОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ; Санкт-Петербург, Россия
3 ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А. И. Бурназяна ФМБА России; Москва, Россия
4 СПб ГБУЗ Городская больница №20; Санкт – Петербург, Россия

Введение

Вконтексте проблемы раннего выявления рака предстательной железы трудно переоценить значимость простато-специфического антигена и сопряжённых с ним показателей, а также роль современных визуализационных технологий. Тем не менее, «золотым стандартом» и единственным инструментом верификации диагноза РПЖ остаётся гистологический анализ структурных особенностей простаты [1, 2].

Важнейшей причиной диагностических ошибок при гистологическом исследовании является сходство микроморфологической симптоматики РПЖ с таковой для других форм патологии, обусловленных воспалением, гипо- или гипербиотическими процессами, доброкачественным опухолевым ростом. Таким образом, выявление аденокарцином может быть затруднено вследствие их маскировки картиной доброкачественных нарушений.

Простатическая интраэпителиальная неоплазия (ПИН) высокой степени, а также нахождение в препаратах участков атипичной мелкоацинарной пролиферации (ASAP) становятся показаниями к повторной биопсии [3].

Получение биоптатов простаты для гистологического исследования в настоящее время перешло в категорию рутинных процедур и выполняется как в условиях стационара, так и амбулаторно. Но, несмотря на это, биопсия все равно остаётся инвазивным методом. Болевые ощущения, гематурия, инфекция мочевой системы, дизурия, различные вазовагальные реакции, нарушения сексуальной функции и др. могут развиться непосредственно после процедуры и в более поздние сроки.

Усовершенствованиеметодов гистологического анализа биопсийного материала позволит уменьшить вероятность получения ложно-отрицательных результатов, сократить численность повторных биопсий, обеспечить своевременность начала лечебных мероприятий [4].

К одному из признаков (критериев) морфологического атипизма при злокачественном перерождении клеток относится отсутствие базальных клеток железистого аппарата предстательной железы [9].

Иммуногистохимический (ИГХ) метод изучения микроморфологической картины заболевания с применением антител клона 34βE12 и моноклональных антител к ядерному белку р63 позволяет, детализируя состояние базального эпителиального слоя железистых структур простаты, подтвердить или опровергнуть наличие аденокарциномы [10].

Антигеном для антител клона 34βE12 является высокомолекулярный цитокертин (ВЦК), образующийся в немалигнизированных базальных эпителиоцитах простаты. Феномен ингибирования экспрессии ВЦК после злокачественного перерождения этих клеток может быть использован при ИГХ-диагностике аденокарциномы предстательной железы [11, 12].

Фермент α-метилацил-КоА-рацемаза (AMACR) является продуктом экспрессии гена р504S и участвует в β-окислении жирных кислот. AMACR образуется в митохондриях и пероксисомах малигнизированных клеток и в настоящее время расценивается как перспективный маркер аденокарциномы предстательной железы [6].

Целью настоящего исследования явилось изучение возможностей ИГХ-идентификации опухолевых клеток и базального эпителиального слоя железистых структур простаты при подозрении на рак предстательной железы.

Материалы и методы

Материалом для исследования послужил биопсийный материал, взятый у 134 больных, находившихся на стационарном лечении в урологическом отделении СПб ГБУЗ Клинической больницы Святителя Луки в период с 2015 по 2017 гг.

Подбор биоптатов осуществляли в соответствии с поставленной целью, для чего ориентировались на результаты гистологического изучения микропрепаратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Таким образом, отобранный биопсийный материал был разделен на 2 группы.

В основную группу № 1 относили образцы ткани простаты, пораженные аденокарциномой (n=72), в группу № 2 – образцы здоровой ткани (n=62).

По завершении подготовительного этапа исследований (приготовление парафиновых блоков, окрашивание срезов толщиной 5 мкм гематоксилинэозином, затем непосредственно гистологическое исследование и разделение на группы) переходили к иммуногистохимическому анализу с применением моноклональных антител BioGenex к α-метилацилКоА-рацемазе, ядерному белку р63 и высокомолекулярному цитокератину (антитела клона 34βE12).

В процессе ИГХ-анализа обращали внимание на экстенсивность и интенсивность окрашивания для AMACR, 34βE12 и ядерного р63.

Таблица 1. Выраженность экстенсивности и интенсивности иммуногистохимического окрашивания ткани простаты, пораженной аденокарциномой (группа №1) и доброкачественным процессом (группа №2)

Источник

Расшифровка иммуногистохимического исследования образцов эндометрия, взятых с помощью пайпель биопсии

» data-image-caption=»» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2020/01/rasshifrovka-immunogistohimicheskogo-issledovanija-obrazcov-jendometrija-vzjatyh-s-pomoshhju-pajpel-biopsii-900×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2020/01/rasshifrovka-immunogistohimicheskogo-issledovanija-obrazcov-jendometrija-vzjatyh-s-pomoshhju-pajpel-biopsii.jpg» title=»Расшифровка иммуногистохимического исследования образцов эндометрия, взятых с помощью пайпель биопсии»>

Алексей Галкин, онколог, хирург. Редактор А. Герасимова

Эти анализы работают по принципу антиген-антитело. С помощью специальных антител выявляют белковые соединения в эндометрии. Но в данном случае это не возбудители болезней, а вещества, необходимые для роста и развития эмбриона или, наоборот, возникающие во время воспаления.

С помощью такой методики можно выявлять количество гормональных рецепторов – нервных окончаний, реагирующих на уровень гормонов.

Пример результатов иммуногистохимии

Расшифровка иммуногистохимического исследования

Для проведения анализа образцы тканей, взятых во время пайпель-биопсии, помещают в фиксирующий раствор на 24-48 часа. Затем обрабатывают и пропитывают парафином, получая парафиновые блоки. Потом блок с помощью микроножа делят на срезы. На полученные тонкие фрагменты наносят раствор антител со специальными светящимися мечеными клетками.

При наличии в эндометрии определённых компонентов, антитела вступают с ними в реакцию. В результате образуются комплексы, которые можно выявить по свечению. Такая реакция, называемая реакцией флуоресценции, показывает наличие искомых веществ.

Результаты иммуногистохимического исследования зависят от количества обнаруженных светящихся соединений – комплексов, интенсивности их окраски и свечения.

Иммуногистохимическое исследование антигенов

Таким образом обнаруживают рецепторы – нервные окончания, чувствительные к определённому гормону. Чаще всего анализируют концентрацию двух видов рецепторов:

Для оценки результатов исследования концентрации (экспрессии) ER и PR применяется метод оценки, называемый Histochemical Score. Он основан на подсчете количества светящихся комплексов – соединений антигенов и антител.

Обнаруженные клетки делят по степени окрашивания:

Затем определяют процентное соотношение клеток, имеющих каждый вариант интенсивности окраски. Полученный результат умножают на степени окрашивания 1, 2 или 3. Готовые подсчеты суммируют. В результате получается число в пределах от 1 до 300. Чем больше показатель, тем сильнее реакция тканей на определенный гормон.

Показатель выявляют для стромальных клеток составляющих основу эндометрия и клеточных структур желез, расположенных внутри него. В результате получаются четыре варианта экспрессии (содержания рецепторов), выражаемое в баллах.

Обычно у здоровых женщин наблюдается умеренная реакция клеток стромы и желез эндометрия. Уменьшение показателя указывает на низкую чувствительность тканей к гормонам, что может приводить к гормональным сбоям и бесплодию.

Значительное превышение среднего уровня может возникать при воспалительных и опухолевых процессах в матке. В этом случае нужно проконсультироваться у врача, который разъяснит результаты, а при необходимости назначит дополнительные исследования.

Исследуется уровень LIF – фактора – белка, влияющего на все процессы, сопровождающие наступление беременности. Он нужен на всех этапах, начиная от развития половых клеток, заканчивая имплантацией и развитием эмбриона и плода.

Экспрессию LIF рассчитывают по количеству окрашенных клеток. Результат оценивается в крестах и баллах.

В некоторых лабораториях применяются другие методы оценки этого показателя, при которых верхний показатель равен не 6, а 10 баллам. Оба варианта считаются нормой. LIF ниже в первой фазе цикла и выше во второй во время «имплантационного окна» – на 17- 24 день цикла.

При подозрении на хронический эндометрит проводится анализ на маркеры CD138 и CD56, появляющиеся при этом заболевании.

Внизу протокола исследования врач указывает гистологический диагноз, поставленный с помощью исследования клеток, и ставит свою подпись. После получения документа нужно записаться на прием к гинекологу, который проведет его расшифровку.

Источник